DNA-Based膜分子探针显示细胞间拉力

DNA-Based膜分子探针显示细胞间拉力

赵斌,Casey O ' brian, Aruni P. K. K. Karunanayake Mudiyanselage,宁维,Yousef Bagheri, Rigumula Wu, Yubing Sun, Mingxu You。j。化学。Soc。2017139, 18182−18185。

DOI:10.1021 / jacs.7b11176

摘要

机械力在细胞迁移、增殖和分化等集体行为中起着关键作用。人们在测量细胞和细胞外基质之间的作用力方面做了大量的工作。然而,细胞-细胞连接处的力研究仍然是一个挑战。在这里,我们报道了一种新的策略,构建膜DNA张力探针来可视化细胞连接处的张力。这些脂质修饰的探针能够高效、稳定地自组装到细胞膜上。在经历邻近细胞产生的拉力后,探针的展开导致荧光强度的大幅增加。与易于接近的荧光显微镜兼容,这些易于使用的膜DNA张力探针可以广泛地用于测量细胞间的张力。

介绍

细胞产生或经历的机械力是细胞粘附、信号传递和功能的关键调节器。[1]虽然已经发展了一些研究环境力量对各种细胞功能影响的技术,但单个细胞之间的机械相互作用在很大程度上仍未被研究。基于距离依赖性荧光共振能量转移(FRET)的分子张力探针是研究细胞间闹剧的一种有前途的方法。[2]然而,膜上蛋白质的持久性(约500个氨基酸长序列)和低荧光敏感性等缺点阻碍了其进一步的应用和应用。在这篇文章中,博士Mingxu你麻省大学的研究人员报道了一种新型的膜DNA张力探针(MDTP),可以观察细胞间的张力,如图1所示。

图1为膜DNA张力探针示意图。

细节

图2显示了MDTP在3T3 (a)和MDCK (b)细胞膜上的高效插入和信号激活的荧光图像。本实验采用添加5 μM的cDNA。比例尺:20 μm。

图3为整合素与MDTP张力的荧光图像。(a)显示RGD-MDTP激活荧光的代表图像(左上)及其连接/膜荧光比值的分布图(右上,测量了200个细胞-细胞接触)。nRGD-MDTP的结果显示为对照(下)。(b) RGD-MDTP显示不同类型整合素介导粘连的代表性图像及其分布图。比例尺:20 μm。

图4为e -cadherin介导的细胞-细胞连接张力的荧光图像。(a) E- cad-MDTP和ProG-MDTP锚定MDCK细胞的代表性图像。(b)用10 mM EGTA处理e -cadherin- mdtp插入的细胞后,破坏e -cadherin诱导的张力。(c)通过添加过量Ca2+重建e -cadherin介导的张力。比例尺:20 μm。

参考

[1] "测量细胞产生的力:可用工具指南"

w·j·珀拉切克;陈,c . S。Nat方法。201613, 415−423。

DOI:10.1038 / nMeth.3834

[2]“E-cadherin处于肌动球蛋白产生的结构性张力下,当外部施加拉伸时,细胞与细胞接触处的张力增加”

Borghi:;Sorokina m;Shcherbakova o . g .;Weis i;电台b . l .;纳尔逊,w . j .;邓恩,a。R。Proc。国家的。学会科学。美国的一个。2012109, 12568−12573。

DOI:10.1073 / pnas.1204390109