笼状分子胶作为光激活标签用于活细胞中客人的核易位

笼状分子胶作为光激活标签用于活细胞中客人的核易位

瑞坂昭夫,莫加木丽娜,大黑口,相田卓三。j。化学。Soc。2018140, 2687 - 2692。

DOI:10.1021 / jacs.7b13614

摘要

我们开发了树突状笼状分子胶(关在笼子里作为核靶向药物传递的标记物,其多重胍离子(Gu+)悬垂体由阴离子光裂解单元(丁酸取代的硝基veratryloxy羰基;英航NVOC)。带负电荷的关在笼子里由于静电斥力,胶- r很难与阴离子生物分子结合。然而,一旦曝光关在笼子里胶- r以紫外光或近红外光(NIR)照射英航NVOC组手机金沙网址关在笼子里胶- r被迅速分离,产生未封闭的分子胶(不是关在笼子里Glue-R),携带多个Gu+吊坠。因为顾+与PO形成盐桥4- - - - - -不是关在笼子里胶- r通过多价盐桥的形成与细胞膜上的阴离子生物分子如DNA和磷脂紧密结合。当标记关在笼子里胶- r,客人可以通过内吞作用被带进活细胞并隐藏在核内体中。然而,当关在笼子里胶- r标签是通过光化学方法释放形成的不是关在笼子里胶- r,客人从核内体逃逸,然后进入细胞质,然后进入细胞核。我们证明了量子点(QDs)标记关在笼子里胶- r最终可通过光照射有效地输送到细胞核中。

介绍

细胞核是亚细胞药物传递的重要细胞器之一。[1]对于核靶向药物传递,药物设计必须能够克服一些细胞屏障,如血浆、内体和核膜。结合胍离子(Gu)是实现药物高效核转位的一种有前途的方法+)丰富的标签,因为顾+富含-的分子可以结合并激活核转运蛋白。t . Aita手机金沙网址集团东京大学的研究报告了笼状分子胶,命名为笼状胶- r(图1),它以细胞核为靶点,可以通过光辐射位点选择性激活。他们设计关在笼子里通过结合他们之前发展的鸟嘌呤树状大分子基序[2]具有阴离子光裂解基团手机金沙网址[3]这样它就不会与细胞膜相互作用。如图2所示,关在笼子里Glue-R可以通过内吞作用进入活细胞,并隐藏在核内体中不是关在笼子里Glue-R photo-irradiation。随后,它们可能在谷的作用下移位到细胞核中+丰富的不是关在笼子里Glue-R标签。

图1显示了的示意图结构关在笼子里胶- r,笼状分子胶,含有9个受保护的胍离子(Gu+),由丁酸取代的硝基veratryloxy羰基(英航NVOC)组手机金沙网址;不是关在笼子里胶- r,带有9谷的光笼分子胶+吊坠;和Glue-R,分子胶不带笼。胶- r的焦核被硝基苯并恶二唑(NBD)或二苯并环辛烷(DBCO)功能化。

图2显示了与a结合的客体(药物)的光触发核移位示意图关在笼子里胶标签。客人/关在笼子里胶结合物通过内吞作用被摄取到活细胞中。光致辐照后,关在笼子里胶水标签被打开以产生一个不是关在笼子里胶水标签,它与内体膜强烈相互作用,因此有助于被标记物的内体逃逸。随后,被标记的客体被传送到细胞核中。

细节

图3 (a)显示了25℃时的zeta电位分布关在笼子里胶- nbd (50 μM) in Tris-HCl (20 mM, pH 7.2) buffer before(蓝色)and after UV exposure at 365 nm for 60 min (不是关在笼子里Glue-NBD,红色),Glue-NBD (50 μM,绿色)作为参考。(b)琼脂糖凝胶电泳图谱(λ前女友= 310 nm)的l-pUC19关在笼子里UV照射前后胶合nbd,用溴化乙啶染色。(c-e)荧光光谱(λ前女友= 480 nm)的DNA-TAMRA (100 nm)关在笼子里胶- nbd (0-160 nM), (d)不是关在笼子里Glue-NBD (0-320 nM),和(e) Glue-NBD (0-160 nM)作为参考。(f)的Binding profile关在笼子里胶水- nbd (0 - 320nm,蓝色),不是关在笼子里Glue-NBD (0-320 nM,红色)和Glue-NBD (0-160 nM,绿色)作为DNA-TAMRA (0.06 nM)的参考。

图4为含Hep3B细胞的共聚焦激光扫描显微照片关在笼子里Glue-NBD(10μM)。(a, b)在(a) 488 nm (λ)激发下的显微照片奥林匹克广播服务公司= 500-530 nm)和(b) 543 nm (λ奥林匹克广播服务公司= 565-620 nm)含溶酶红。(c) (a)和(b)的合并图像。(d, e)在488 nm (λ)激发下记录的显微照片奥林匹克广播服务公司= 500-530 nm,绿色)和710 nm(双光子;λ奥林匹克广播服务公司= 390-465 nm,蓝色)。Hep3B细胞关在笼子里胶- nbd,在37℃含Hoechst 33342的emm中孵育,在365 nm紫外照射前(d)和后(e) 2分钟。(f, g)在488 nm (λ奥林匹克广播服务公司= 500-530 nm),在710 nm双光子照射前(f)和后(g)。(f)中的白色虚线圆表示辐照区域。比例尺= 20 μm。

图5为Hep3B细胞在405 nm (λ)激发下的共聚焦激光扫描显微图奥林匹克广播服务公司= 430-520 nm,蓝色)和488 nm (λ奥林匹克广播服务公司= 625-680 nm,红色)。Hep3B细胞在含EMEM的环境中37℃孵育3 h关在笼子里胶- qd (10 nM),用D-PBS冲洗,然后在37°C含Hoechst 33342的EMEM中孵育10分钟,在(a)和(b, C) 365 nM紫外线照射2分钟前。(d) (c)中沿黄线的截面图像。比例尺= 20 μm。

参考

药物设计和传递的t亚细胞靶向策略

Rajendran l;Knolker周宏儒。;西蒙斯,K。纳特,药物发现2010929−42。

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[2]“通过低聚醚间隔物携带多重胍离子悬浮物的分子胶:微管对解聚的稳定性”

Okuro k;Kinbara k;Tsumoto k;Ishii:;阿依达,T。j。化学。Soc2009131, 1626−1627。

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波长选择性解调光保护组:动态系统中的策略与应用手机金沙网址

汉森,m . j .;Velema w . a;我们针对m . m .;西曼斯基,w;Feringa, b . L。化学。Soc。牧师。201544, 3358−3377。

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