Cell-Permeant Large Stokes Shift dye for转染- free multicolour Nanoscopy手机金沙网址艾德。

Alexey N. Butkevich, Grazv̌ydas Lukinavicǐus, Elisa D’este和Stefan W. Hell。j。化学。Soc。2017，139, 12378年。

摘要

摘要:以9-亚氨基蒽酮、9-亚氨基-10-硅酮和9-亚氨基-10-格玛蒽酮为荧光载体，设计了>140 nm Stokes位移的细胞渗透红色荧光染料标记物。相应的探针选择性地靶向线粒体、溶酶体和f -肌动蛋白，表现出低毒性，并能在神经元、人成纤维细胞、U2OS和HeLa细胞中进行刺激发射耗尽(STED)纳米镜检查。结合已知的小型Stokes位移染料，我们的探针可在常用的775 nm STED波长下对内源性靶标进行活细胞三色STED纳米镜检查。

介绍

多色超分辨率荧光显微镜是观察细胞内结构与生物分子相互作用的一种有价值的方法。实现多色成像的一个直接方法是在广泛使用的775 nm STED波长的纳米显微镜上引入第三个通道，这依赖于大Stokes位移(LSS)标签。然而，用于活细胞标记的LSS染料仍然缺乏。在这篇文章中,s . w .地狱他和他的同事开发了LSS荧光团，能够穿透完整的活细胞的细胞膜。此外，它们应该与常用的775 nm STED波长兼容。下面是Klań集团最近的报告手机金沙网址^［1］以及吴和伯吉斯的早期研究，^[２]他们已经鉴定出9-氨基吡罗宁支架作为罗丹明的LSS类似物。

细节

图1显示了LSS探针的化学结构。(i)质子化-去质子化行为影响染料的环境敏感性1 - 4。(ii)用于标记细胞内结构的配体a - d。

图2显示了针对不同细胞器的6种探针的性能。(a)与DMSO对照，标记探针处理24小时后不同DNA含量的细胞百分比，对应于细胞周期:G1、S、G2和m。DNA含量低于单倍体(SubG1)的细胞被认为是不可活的。(b)用小鼠抗α微管蛋白和6标记的绵羊抗小鼠二次抗体染色的固定人成纤维细胞的共聚焦和STED图像。(c)微管表观厚度FWHM与失磁功率的关系。(d - f)用(d) 0.25 μM 6 -actin染色的活人成纤维细胞的STED图像(d - f)3 c)， (e) 2 μM 6 - tpp (3)和(f) 3 μM 6 -lyso (3 b）

图3为CX-TPP探针四色显微镜观察结果。(a)用于同时多色成像的Alexa Fluor 488(黄色)、CX(洋红)、580CP(绿色)和GeR(青色)染料的归一化吸收和发射光谱。去激激光(黑线)设置在775 nm。(b)用于四色成像的激发/探测方案。(c)用1 μM 580CP-actin、2 μM g -tubulin、2 μM CX-TPP (1a)和5 μg/mL Alexa Fluor 488-WGA偶联物染色的活人成纤维细胞四色图像。(d) 1 μM 580CP-actin、2 μM ge -tubulin、0.5 μM CX-TPP染色的活体大鼠海马神经元(16 DIV)四色图像。